細胞與克隆技術論文

　　克隆技術是眾多具有極大影響力的技術之一。下面是小編精心推薦的，希望你能有所感觸!

　　一：家兔克隆骨髓基質細胞的體外培養

　　【摘要】 目的 探討家兔骨髓基質細胞在體外傳代的培養。方法 取家兔股骨骨髓，分離骨髓基質細胞，於1640培養體系中培養，之後固定計數。結果 在2~6×106 個/cm2範圍內，其接種細胞數與所形成的克隆集落***CFU-F***數呈良好線性關係。隨著培養時間的延長，克隆集落也增多，變大。3周齡家兔的造血基質祖細胞較6周齡者為多。結論 基質祖細胞CFU-F呈非均質性的，可能存在不同亞群。

　　【關鍵詞】 家兔;骨髓;造血基質祖細胞;克隆

　　作者單位：100021北京，中國疾病預防控制中心環境與健康相關產品安全所***趙偉霞***;湖北省武漢疾控中心***趙丁源***

　　The culture of colonies of rabbit bone marrow stromal cell in vitro

　　ZHAO Wei-xia, ZHAO Ding-yuan. Institute for Environmental Health and Related Product Safety, Chinsese Center for Disease Control and Prevention，Beijing 100021,China

　　【Abstract】 Objective To investigate the growing variation of the culture of colonies of rabbit bone marrow stomal cell in vitro. Methods Extracted rabbit bone marrow stomal cell, then cutlured these cell isolated in 1640 cultre system of CO2incubator. Count the colony after fixed. Results There was a clearly linear relationship between the number of implanted cells and the formed colonies in a some concentration ***2~6×106 /cm2***,and the colonies of bone marrow stromal cell were increasing with the time extending.The CFU-F of the three weeks rabbit were more than that of the six weeks rabbit. Conclusion The CFU-F are nonhomogenous, and might be heterogeneous subgroups.

　　【Key words】 Rabbit; Bone marrow;Hematopoietic matrix grand mother cells; Colony

　　骨髓基質細胞是支援和調節造血細胞定居、增殖、分化、發育和成熟的內環境主要細胞成分[1]。曾對小鼠體外單層培養造血基質細胞的培養研究，發現其接種的細胞數與成集落數呈良好的線性關係[2]。目前對家兔的骨髓器官基質細胞的研究國內研究有過報道[3]。本文用體外培養骨髓基質細胞技術[4]對家兔的骨髓基質細胞體外培養特點進行了探討。

　　1 資料與方法

　　1.1 材料來源 實驗動物系北京科宇動物養殖中心飼養的雌雄兩性、3~6周齡之純種家兔。

　　1.2 主要試劑與器材 RPME1640培養液，小牛血清***中國藥品生物製品檢定所***，平底中性玻璃培養瓶，二氧化碳孵箱，微孔濾網。

　　1.3 骨髓單個核細胞製備 6周齡家兔用乙醚麻醉處死;3周齡者則用頸椎脫臼致死。在無菌條件下取雙側股骨修潔後剪掉骺端，用帶16號針頭注射器以1640培養液衝出骨髓細胞，再用濾網過濾製取單個核細胞懸液，計數後用所需細胞量進行體外CFU-F培養。

　　1.4 CFU-F培養和測定 將6周齡家兔的骨髓細胞以2×106 個/cm2, 3周齡的以2~6×106 個/cm2置於含20%小牛血清的1640培養液的培養體系的培養瓶中，於37℃，5%CO2，飽和溼度的CO2培養箱內培養。分別於第4天，第6天用含20%小牛血清的1640培養液換液，培養到第八天沖洗後用甲醛固定半小時，蒸餾水沖洗後用姬姆薩染色12 min後晾乾，待計數用。

　　2 結果

　　2.1 CFU-F克隆集落形成過程觀察 於培養第4天在倒置顯微鏡下觀察培養細胞，發現淡紅色背景下***紅細胞***有圓形發亮的較大基質細胞生長，拉長的細胞較少見，振盪後觀察未見發亮細胞浮起，說明細胞已貼壁。培養第六天鏡下觀察，發現基質細胞明顯增多，拉長者較多，形成了克隆集落，6周齡的骨髓基質細胞 生長速度明顯低於3周齡者，且培養同天數的6周齡的克隆集落數明顯低於3周齡的克隆集落數。

　　2.2 CFU-F計數 計數由50個以上細胞所形成的集落數，結果如圖1、2和表1。由50~99個細胞組成的集落為小集落，由100~199個細胞組成的集落為中集落，>200個細胞者的為大集落。

　　3 討論

　　從以上述結果可以發現：培養時間越長，形成克隆集落相對越多，3周齡者，骨髓細胞較多，造血基質祖細胞也較多，形成的克隆集落數也多。在2~6×106個/cm2範圍內，形成的克隆集落數與種植細胞數呈良好的線性關係。

　　通過對集落大小，所含細胞數與密度比較，表明CFU-F非均質性的，可能存在不同亞群。這對體外培養骨髓細胞的增殖與分化有一定的指導意義。

　　參 考 文 獻

　　[1] 姚程，彭麗萍，姜振宇,等.骨髓基質細胞體外擴增能力及支援造血的研究.白求恩醫科大學學報,2001,17***4***：386-388.

　　[2] 於洪臣, 郭佔之, 畢曉穎, 等.白求恩醫科大學學報, 1991,17***3***:219.

　　[3] 王春豔，何欣，李增新,等.兔骨髓基質細胞的分離培養研究.北華大學學報，2005,6***6***：520-522.

　　[4] 蔡國鋒，黃開，章慶國.兔骨髓基質幹細胞體外培養的實驗研究.東南大學學報，2006，25***1***：16-19.

點選下頁還有更多>>>