高中生物單克隆抗體實驗總結

　　考試是檢測學生學習效果的重要手段和方法，考前需要做好各方面的知識儲備。下面是小編為大家整理的，希望對大家有所幫助!

　　***一***動物的選擇

　　目前應用最廣的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠為好。就品系而言以Balb/c小白鼠應用最廣，由於所有的小白鼠骨髓瘤系均從Balb/c小白鼠系誘匯出來。Balb/c系小白鼠必須用純系的，雌雄均可，以8~12周齡為宜。

　　大白鼠也可，能產生較多量的單抗體。現在已經在小鼠雜交瘤的基礎上，發展了小鼠-大鼠，小鼠-人以及人-人雜交瘤技術。

　　***二***免疫

　　一般而言，抗原的純度不很重要，特別是免疫原性較強的抗原。

　　免疫程式、劑量和方法是關係到是否能得到所需要的單抗體的關鍵之一。

　　正常小鼠脾臟含有能產生各種不同抗體的B淋巴細胞，一隻純種小白鼠估計能產生1.0×107~5.0×107種不同的抗體。因此一隻正常的小白鼠的脾細胞與小鼠骨髓瘤融合，只能有千萬分之一的機會獲得某一種特定抗體。所以為了進步得到某種雜交瘤的機會，必須加強免疫，使產生特異性抗體的B淋巴細胞大量增加。

　　B淋巴細胞的不同發育階段對獲得陽性雜交瘤也有很大影響。有人以為處在轉化時期的B淋巴細胞可能更易於融合，而免疫以後7~8天，固然是抗體產生的高峰時期，但形成有活力的雜交瘤細胞的可能反而減少。故一般以為加強免疫後的第三天應殺鼠取脾做細胞融合。

　　1.可溶性抗原***蛋白質*** 以1mg/ml～5mg/ml的溶液加等量的弗氏完全佐劑乳化，分多點小鼠皮下注射，總量為0.3ml～0.6ml，間隔3～5周再同樣注射一次，10天后，斷尾取血一滴，測抗體效價，選滴度高的小鼠做融合試驗。一個月後可以經靜脈***尾靜脈***給予無佐劑抗原0.2ml～0.4ml，3～4天后，殺死小鼠取脾做融適用。

　　2.顆粒性抗原如抗原來源方便，可以不加佐劑而增加免疫次數，縮短間隔時間。例如用羊紅血球免疫小白鼠，以1%濃度每隻皮下注射0.2ml，每週2次，共免疫5～8次，取脾前3天，再免疫一次即可。有人以為最後一次免疫劑量要大，大到近於免疫耐受的程度更好。

　　單抗技術是主要由抗原製備，免疫動物，細胞融合，篩選雜交瘤細胞，克隆化培養，單克隆抗體的大量製備與鑑定等一系列實驗組成的實驗系統，其核心部分是細胞融合。細胞融合是單克隆抗體技術的中心環節，基本步驟是將脾細胞和骨髓瘤細胞混合後加入PEG使細胞彼此融合。

　　實驗原理:B淋巴細胞能夠產生抗體，但在體外不能進行無限分裂;而骨髓瘤細胞可以在體外無限傳代，但不能產生抗體。將這兩種細胞融合後，用一特殊選擇培養基***HAT***阻斷正常細胞或自體融合細胞的DNA合成通路，而雜交瘤細胞可利用補救通路合成DNA得以生存，且既能產生抗體，又能無限增殖，並以此生產抗體的技術。

　　實驗方法

　　材料：Balb/c小鼠，SP2/0骨髓瘤細胞，50%PEG，不完全培養液，HAT培養液，75%酒精，剪刀，鑷子，紗布，離心管，網篩，大小瓶皿，直頭滴管，彎頭滴管，瓶塞，培養瓶蓋，離心管蓋，燒杯***加入37℃水***，泡沫板，大頭針，96孔培養板，計時器，顯微鏡，計數板等。

　　單克隆抗體技術方法：

　　顯微鏡下觀察血片或骨髓片，找出異常細胞。

　　***1***飼養細胞的製備

　　1.常用Balb/c小鼠，拉頸處死，浸泡於75%酒精內，3～5min。

　　2.用無菌剪刀剪開面板，暴露腹膜，剪一小口，用滴管注入5～6ml不完全培養液***嚴禁刺破腸管***。

　　3.反覆沖洗，將沖洗液吸入15ml離心管，1000rpm5min離心，用完全培養液混懸，調整細胞密度。

　　***2***SP2/0骨髓瘤細胞的製備

　　1.選取狀態良好、處於對數生長期的SP2/0骨髓瘤細胞。

　　2.棄去原瓶中培養上清，用不完全培養液沖洗三遍。

　　3.再以不完全培養液對細胞進行充分吹打，得到的細胞懸液移入15ml離心管。