藥學實習畢業論文
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篇1
淺談全自動生化分析儀的試劑的合理排序
【摘要】 目的 探討全自動生化分析儀的試劑的合理排序,以提高檢測的準確度。方法 終點法、酶法在不同條件下測定結果的比較。結果 試劑排序不合理影響結果準確度。結論 全自動生化分析儀的應用,應注意試劑的合理排列,以提高檢測結果的準確性。
【關鍵詞】 試劑排序;誤差;準確度
全自動生化分析儀的自淨率是有限的,隨著儀器使用週期延長及多種主客觀因素的影響,增加了試劑探針汙染攜帶率,檢測試劑排序不當,就可能出現不可逆轉的誤差,直接影響檢測結果的可靠性,很容易給臨床造成無效資料,直接影響臨床診療水平。通過長期臨床檢測實踐並參考相關文獻內容,歸納出臨床生化檢測試劑的排列順序,使同一份標本在進行多專案檢測時,儘量減小因試劑間相互干擾引起的誤差,提高了批檢測結果的準確性。
1 材料與方法
1.1 檢測標本
***1***待檢血清:門診、住院病人靜脈血清;***2***質控血清:Roche公司提供;***3***標準液:Roche公司、北京利德曼生化技術有限公司提供。
1.2 檢測試劑
Roche原裝及北京利德曼生化技術有限公司成品試劑盒。
1.3 檢測儀器
Roche MODULAR 2p生化分析儀。
1.4 檢測方法
各檢測專案引數通過電腦輸入,操作嚴格按照儀器使用手冊及試劑說明進行。
2 結果與原則
2.1 試劑的排列順序與方法學
見表1。表1 試劑的排列順序與方法學***略***
2.2 試劑排序原則
2.2.1 按反應所需pH
***1***pH<5放在前。如DBI、TBI、ALB;***2***pH≈7。如ALT、AST、HBDH、BUN、CK-MB、CK、Cho、TG、HDL、Glu、UA;***3***pH>8。如:γ-GT、ALP、LDH、Ca、GSP、Cr、TP。
2.2.2 按試劑所含成分
***1***緩衝液成分。如磷酸鹽緩衝液,Tris緩衝液;***2***輔酶種類。如NADH、NADPH。
2.2.3 按檢測反應的性質
***1***終點法,速率法,免疫比濁法;***2***雙縮脲法測TP放於末位,利用雙縮脲試劑去蛋白去汙的作用;***3***苦味酸試劑汙染較重,且不易清除,儘量往後面放。
2.3 實驗結果
2.3.1 終點法
見表2、表3。表2 pH值的影響***略***表3 反應物干擾***略***
2.3.2 速率法
見表4、表5。表4 pH值的影響***略***表5 反應物的影響***略***
3 結論與分析
3.1 結論
檢測試劑合理有序排列,能減少探針攜帶誤差,提高檢測結果的準確度。
3.2 分析
3.2.1 終點反應
***1***pH值改變:反應物之間,反應物緩衝液之間因攜帶誤差而使pH值改變,反應達不到終點。如雙縮脲法測血清總蛋白,若其他條件相同,反應在鹼性***pH值8~9***條件時,蛋白肽鍵***―CONH***才都能與鹼性銅溶液作用生成紫色反應,完全測出血清蛋白的總量。若pH<8時,總蛋白測定結果偏低,直接影響球蛋白、白蛋白/球蛋白的結果。***2***緩衝液混入反應物:磷酸鹽緩衝液混入無機磷試劑,會使檢測結果偏高。應將含有磷酸鹽緩衝液的檢測專案放於無機磷後檢測。如GOD-POP法測Glu。
3.2.2 速率法反應
***1***輔酶結構:輔酶參與反應時,其還原型、氧化型在340nm處曲線變化是相悖的,由攜帶誤差使上升反應或下降反應不徹底,導致無效值出現。***2***最適pH值:酶活力測定在最適pH值時,反應最快,靈敏度最高,但是因為緩衝能力有限,可因攜帶誤差使酶促反應出現無效值。大多數酶反應pH值在6.0~7.5之間;ALP、γ-GT、LDH須在鹼性條件下最適宜。
3.2.3 反應物間的作用
***1***CK檢測不應在ALP、Ca檢測之間,因CK反應液中加入EDTA-Na,能抑制ALP活性,結合Ca而使結果偏低。***2***ALT、AST反應液中均含有LDH,可干擾LDH檢測結果。***3***Cho,Glu,UA,HBDH用PBS緩衝液,干擾無機磷測定。***4***BUN酶法測定因穀氨酸脫氫酶***GLDH***消耗NADH,不易放在底物NADH如ALT、AST專案前檢測。***5***同時測定一個專案的不同標本***血、尿、腦脊液等***:應將不同標本放入不同通道測定。臨床生化檢測應注重試劑的合理排序,嚴格按規程操作,及時清除試劑瓶口處結晶,以免導致試劑水平檢測錯誤;對於穩定性差的試劑儘量減少與空氣接觸面積;有沉澱、變渾濁及顏色異常改變的試劑及時更換,儘量清除無效值,提高生化檢測的實效性;為臨床診斷髮揮其應有的作用。
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