革蘭氏染色的注意事項

注意事項

１、選用活躍生長期菌種染色，老齡的革蘭氏陽性細菌會被染成紅色而造成假陰性。

２、塗片不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性。

３、脫色是革蘭氏染色是否成功的關鍵，脫色不夠造成假陽性，脫色過度造成假陰性。

實驗流程

１、取載玻片用紗布擦乾，載玻片的一面用馬克筆畫一個小圈（用來大致確定菌液滴的位置）。塗菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。

２、塗片

液體培養基：左手持菌液試管，在酒精燈火焰附近５釐米左右開啟管蓋；右手持接種環在火焰中燒灼滅菌，等冷卻後從試管中沾取菌液一環，在潔淨無脂的載玻片上塗直徑２毫米左右的塗膜，最後將接種環在火焰上燒灼滅菌。

固體培養基：先在載玻片上滴一滴無菌水，再用接種環取少量菌體，塗在載玻片上，使其薄而均勻。

３、晾乾：讓塗片在空氣中自然乾燥。

４、固定：讓菌膜朝上，通過火焰２－３次固定（以不燙手為宜）。

５、染色：將固定過的塗片放報紙上，滴加草酸銨結晶紫液，染１分鐘。

６、水洗：用水緩慢沖洗塗片上的染色液，用吸水紙吸乾。簡單染色結束可觀察細胞形態。

７、媒染：滴加１滴碘液，染１分鐘，水洗。

８、脫色：吸去殘留水，連續滴加９５％乙醇脫色２０－３０秒至流出液無紫色，立即水洗。

９、復染：滴加蕃紅復染３－５分鐘，水洗。至此，革蘭氏染色結束。