飼養層細胞的影響因素

　　飼養層的影響，主要體現在飼養層種類、絲裂黴素處理飼養層的時間、飼養層細胞的代數和飼養層細胞的密度等。下面是小編精心為你整理的，一起來看看。

　　飼養層種類

　　STO PMEF：　對各種動物都較適宜，，但最可靠的方法還是根據動物種類篩選最佳飼養層為宜。有研究表明，PMEF比STO更適合用於小鼠ES***胚胎幹細胞***的培養。

　　UE***子宮上皮細胞***

　　BRL***大鼠肝細胞***等

　　動物種類

　　需要經過篩選來確定最適宜該種動物ES分離克隆的飼養層

　　絲裂黴素處理滋養層的時間

　　目前絲裂黴素***常用有絲分裂阻斷劑***處理時間在小鼠成纖維細胞上一般要求為：在37攝氏度，5%二氧化碳飽和溫度的條件下處理24h，時間過短達不到預定目的，成纖維細胞不能被成功地抑制住，時間過長則使細胞老化，活性下降，分泌因子的能力降低，從而直接影響ES細胞增殖和分化的抑制。同時處理完的清洗工作也很重要，一般要求用無鈣鎂PBS沖洗4~5遍，以確保絲裂黴素的徹底清除。

　　飼養層細胞的代數及密度

　　以小鼠成纖維細胞為例，選3~5代，密度為10^6-10^7個/ml為宜，代數過低所含雜細胞太多，代數過高則細胞活力降低。

　　飼養層細胞的定義

　　在細胞培養中有分化抑制作用的單層貼壁細胞

　　所謂飼養層細胞就是指一些特定細胞***如顆粒細胞、成纖維細胞、輸卵管上皮細胞等已在體外培養的細胞***，經有絲分裂阻斷劑***常用絲裂黴素***處理後所得的細胞單層。是細胞培養，尤其是胚胎幹細胞培養常用的生長增值促進劑和分化抑制劑。

　　在正常機體內，細胞除了獲得一些血液來的營養外，還在細胞與細胞之間互換特殊的物質，用於分裂分化和營養等。因而，在細胞體外培養中，除了正常的培養基外，先培養一層特殊的細胞，然後再在其上接種要實驗的細胞，這樣更能模擬體內環境。這些特殊的細胞就是飼養層細胞，通常是成纖維類細胞，這些細胞可以提供實驗細胞更好的營養，有的分化研究則是必須有飼養層細胞。

　　在體外的細胞培養中，單個的或數量很少的細胞不易生存與繁殖，必須加入其它活的細胞才能使其生長繁殖，加入的細胞稱之為飼養細胞***Feeder cell***。在細胞融合和單克隆的選擇過程中，就是在少量的或單個細胞的基礎上使其生長繁殖成群體，因此在這一過程中必須使用飼養細胞。

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