食用菌母種製作視訊

　　常見食用菌品種母種製作技術

　　一、常見母種培養基有以下幾種：

　　1.PDA培養基：馬鈴薯200g、瓊脂1820g、葡萄糖20克g，水1000ml，pH自然。此培養基廣泛適用於各種菇類，但不適合草菇、猴頭菇菌絲的生長。

　　2.馬鈴薯綜合培養基：馬鈴薯200g、瓊脂20g、葡萄糖20g，磷酸二氫鉀1.5g，硫酸鎂1.5 g，維生素B15～10g，水1000ml，pH自然。此配方適合雞腿菇、平菇、雙孢蘑菇、金針菇、草菇等菇類菌絲生長。如在配方中加入蛋白腖20g，猴頭菇菌絲生長會更加旺盛、粗壯。

　　二、母種培養基的製作方法如下：

　　1.浸煮容器

　　一般選用玻璃容器、不鏽鋼鍋或鋁鍋、搪瓷鍋等，生產中不能用鐵鍋、銅鍋，以免鐵鏽、銅鏽混進培養基。

　　2.配製方法

　　先按照培養基配方準確稱量培養基的各種成分，再進行配製。以配製馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基為例，介紹其培養基配製方法如下。

　　選整齊且沒有芽變***芽變綠***的馬鈴薯，洗淨去皮並挖掉芽眼，切成薄片，稱取200g放入容器內，加入1 000ml水，加熱煮開15～30分鐘，至酥而不爛的程度，用四層紗布過濾***見圖1所示***，取其濾液，加開水補足1 000ml。然後在煮汁中加入稱量好的瓊脂，用小火加熱，並不斷用玻璃棒攪拌，至瓊脂全部融化，再用紗布過濾一次，倒入量杯，用開水補足1 000ml。再加入葡萄糖***或蔗糖***，用小火再煮幾分鐘並用玻璃棒不斷攪拌，待葡萄糖***或蔗糖***全部融化，停火倒入量杯並用開水補足1 000ml。在配製過程中，先加入主要元素，再加入微量元素，最後加入維生素或生長素等。如需讓培養基清亮透明，可用紗布將煮好的培養基趁熱過濾一次，倒入容器，待用。

　　3.分裝

　　培養基配好後，應趁熱將其分裝到試管內，以免瓊脂冷凝。分裝時應避免培養基粘附在試管口，若瓊脂粘住棉塞，既影響接種又容易滋生雜菌。分裝時可用漏斗分裝，裝入試管中的量，最好不要超過試管長度的1/5，如圖2所示。

　　4.塞棉塞

　　培養基分入試管後，應立即塞好棉塞。應用普通棉花***不能用脫脂棉，因其易吸水變潮，滋生雜菌***做棉塞。棉塞塞入試管的長度應為棉塞長度的2/3，鬆緊度適中，既能保持通氣又能防止雜菌汙染，即用手握住棉塞，試管不能掉下，稍微用力才能把棉塞拔下為好，見圖3。

　　塞好棉塞後，每5支或7支包紮一捆，棉塞部分用牛皮紙或舊報紙用繩捆好。包紙的作用是防止滅菌時冷凝水淋溼棉塞，並防止接種前培養基水分散失或受雜菌汙染。

　　5.滅菌及擺斜面

　　試管包紮好後，放入手提式高壓鍋的消毒桶內，蓋蓋滅菌。待壓力升至0.05兆帕時，開啟排氣閥，放淨鍋內冷空氣，再加壓至0.15～0.17兆帕，維持30分鐘，停止加熱。待鍋內壓力下降為0後，先將鍋蓋開啟一小縫，使熱氣溢位，停3～5分鐘後，再開啟鍋蓋。利用鍋內的餘熱將棉塞烘乾，防止棉塞受潮。待溫度降至60℃左右，再擺成斜面，以防止冷凝水在試管內積聚過多。

　　擺放斜面時，試管塞棉塞的一頭下面墊厚1釐米的木板或鋼板等，斜面長度不要超過試管長度的1/2，待冷卻後即成斜面培養基，如圖4、圖5所示。

　　6.無菌培養

　　滅菌後的培養基，應隨機抽取幾支放在25℃左右的恆溫箱內培養2～3天，若無雜菌生長，便可做菌種使用。

　　三、母種的轉管與培養

　　母種的轉管培養即將一支長滿菌絲的試管在無菌操作下，分別轉接到多隻試管中培養。一般每支母種可擴接30～50支，生產上供應的多為子代母種。它可以再次轉管擴接。一般每支又可擴接成20～25支子代母種。母種的轉管與培養需注意兩個關鍵問題，一是轉管接種箱要嚴格消毒，二是轉管次數不宜過多，因轉管代數過多易使菌種生活力降低，轉管次數在4次以內為宜。

　　1.接種箱消毒

　　首先用金星消毒液或其他消毒藥品，把接種箱內擦拭乾淨，然後放入分離所得的母種和試管培養基、接種工具、酒精燈、火柴及盛放高錳酸鉀與福爾馬林反應的碗***按福爾馬林10ml/m3+高錳酸鉀5g放入所盛碗內***，立即封閉接種箱，讓其發生反應，密閉燻蒸30分鐘。也可用煙霧消毒盒5～6g/m3，密閉燻蒸30分鐘。

　　2.轉管

　　操作者在轉管前，應穿好工作服，剪好指甲，洗淨手。將手通過袖筒伸入接種箱內，再用酒精棉球把手及裸露的手腕擦拭一遍。點燃酒精燈，左手持1支分離母種試管和1支斜面培養基，右手拿接種鉤***見圖6-a***，首先將接種鉤在酒精燈外焰上灼燒滅菌，接著用右手小指和無名指把斜面母種上的棉塞在火焰上拔掉***見圖6-b、圖6-c***，將接種鉤伸進斜面菌種試管，稍冷卻後，將母種斜面上的老菌塊及乾燥部分挖掉，棄之不用，然後取一小塊麥粒大小***1cm×0.3cm***的菌種塊***一定要帶培養基***移接到斜面培養基的中央，抽出接種針，灼燒試管口，迅速將棉塞通過火焰烤一下塞上***見圖6-d、圖6-e、圖6-f***。在試管上貼上標籤。以此類推。直至把接種箱內斜面培養基接完為止，一般由一個人獨立完成。此操作中既要注意試管口和接種鉤始終不要離開火焰無菌區，還要注意避免火焰燒死菌種。

　　3.培養

　　菌種接好後，直接轉入培養箱或培菌室內培養，溫度調節在24～28℃，並注意培養室內的通風換氣，遮掩窗戶，避免光線過強，經常檢查，及時揀出雜菌汙染的試管，確保菌種純度。菌種菌絲長滿試管後，或及時使用，或放置在4℃以下的冰箱內低溫保藏。

　　值得注意的是：母種培養基製作過程中，嚴格按照無菌操作規程進行。選好培養基配方，按其比例嚴格稱量原料，不可多也不可少，否則菌絲生長會受到嚴重影響。製作好的母種培養基，可用於母種的分離培養、提純復壯及轉管、保藏等。

　　四、純種分離

　　生產上常用組織分離法進行母種菌種的分離。組織分離法是從種菇上切去一小塊組織移接於試管斜面培養基，經培養獲得菌種的方法。該方法具有操作簡單，有利於保持原來品系的遺傳特性，成功率高等特點。

　　1.種菇選擇 選種菇時，應到生長旺盛、無嚴重病蟲害的豐產區，採取菇朵圓整、菇體潔白、菌蓋肥厚且緊密硬實、菇柄短且粗壯，具有原品種優良性狀、6～7成熟的第二茬單生菇作為種菇。

　　2.種菇消毒 種菇選好後，去除表面雜質及菌柄，用75%的酒精棉球擦試種菇表面，然後把斜面試管隨同接種工具***如接種刀、接種鏟、接種鉤、鑷子等***一同放入接種箱內，用氣霧消毒劑5g/m3點燃密閉燻蒸30分鐘。

　　3.分離 用消毒過的接種刀，把種菇縱剖為二，在菇蓋與菇柄連線處的部位，切取綠豆粒大小***約0.2cm×0.2cm***的菌肉，移接到斜面培養基的中央。然後把接好的試管放入恆溫25℃的無菌環境中培養，2～3天后，組織塊就能長出白色菌絲，經檢查、優選，選出菌絲生長旺盛且無雜菌的試管，作為母種，用於生產或保藏。