高一生物必修蛋白質技術知識點

　　蛋白質是生命的物質基礎，那關於高一生物蛋白質技術的知識點有哪些呢?下面是小編給大家帶來的，希望對你有幫助。

　　高一生物蛋白質技術知識點

　　1.血紅蛋白的提取和分離

　　倍體積的生理鹽水，緩慢攪拌10min，低速短時間離心，如此重複洗滌三次，直至上清液中沒有黃色，表明紅細胞已洗滌乾淨。

　　②血紅蛋白的釋放 在蒸餾水和甲苯作用下，紅細胞破裂釋放出血紅蛋白。

　　注：加入蒸餾水後紅細胞液體積與原血液體積要相同。加入甲苯的目的是溶解細胞膜，有利於血紅蛋白的釋放和分離。

　　2.粗分離

　　①分離血紅蛋白溶液

　　將攪拌好的混合溶液離心後，試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的甲苯層，第2層為白色薄層固體，是脂溶性物質的沉澱層，第3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液，第4層是其他雜質的暗紅色沉澱物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉澱層，於分液漏斗中靜置片刻後，分出下層的紅色透明液體。

　　②透析

　　取1mL的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300mL的物質的量的濃度為20mmol/L12h換樣品的緩衝液。

　　3.純化 調節緩衝液面：開啟色譜柱下端的流出口，使柱內凝膠面上的緩衝液緩慢下降到與凝 ↓ 膠面平齊，關閉出口。

　　加入蛋白質樣品：用吸管將透析後的樣品沿管壁環繞移動加到色譜柱的頂端。加樣後， ∣ 開啟下端出口，使樣品滲入凝膠床內，等樣品完全滲入凝膠層後，

　　↓ 關閉出口。

　　調節緩衝液面：加入20mmol/L的磷酸緩衝液到適當高度

　　↓

　　洗脫：連線緩衝液洗脫瓶，開啟下端出口，進行洗脫。

　　↓

　　收集分裝蛋白質：待紅色的蛋白質接近色譜柱底端時，用試管收集。

　　4.純度鑑定------SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳***選做*** 三、注意事項

　　電泳技術

　　電泳技術就是在電場的作用下，利用待分離樣品中各種分子帶電性質以及分子本身大小、形狀等性質的差異，使帶電分子產生不同的遷移速度，從而達到對樣品進行分離、鑑定或提純的目的。

　　2. 紅細胞的洗滌

　　如果分層不明顯，可能是洗滌次數少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉澱，也得不到純淨的紅細胞，影響後續血紅蛋白的提取純度。

　　3.如何檢測凝膠色譜柱的裝填是否成功

　　由於凝膠是一種半透明的介質，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。

　　此外，還可以加入大分子的有色物質，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的效能良好。如果色譜柱出現紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。

　　4.為什麼凝膠的裝填要緊密、均勻?

　　如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內形成;5.沸水浴處理加入洗脫液的溼凝膠的目的;不但節約時間，還能除去凝膠中可能帶有的微生物和排;6.G-75;“G”代表凝膠的交聯程度，膨脹程度及分離範圍，7;7.裝填完後，立即用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填;8.加入檸檬酸鈉有何目的?為什麼要低速、短時離心;9.與其他真核細胞相比，紅細胞的特點及這一特點對;哺乳動

　　如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內形成無效的空隙，使本該進入凝膠內部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動次序，影響分離的效果。

　　5.沸水浴處理加入洗脫液的溼凝膠的目的

　　不但節約時間，還能除去凝膠中可能帶有的微生物和排除凝膠內的空氣。

　　6.G-75

　　“G”代表凝膠的交聯程度，膨脹程度及分離範圍，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時吸水7.5g。

　　7.裝填完後，立即用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填緊密

　　8.加入檸檬酸鈉有何目的?為什麼要低速、短時離心?為什麼要緩慢攪拌? 防止血液凝固;防止白細胞沉澱;防止紅細胞破裂釋放出血紅蛋白。

　　9.與其他真核細胞相比，紅細胞的特點及這一特點對進行蛋白質的分離的意義

　　哺乳動物及人的成熟的紅細胞是雙面凹圓餅狀，沒有細胞核和細胞器。其含有的血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什麼時候應該收集脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。

　　10.如何檢測血紅蛋白的分離是否成功

　　如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出;如果紅色區帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關。