念珠菌顯色培養基的臨床應用研究

　　【摘要】  評價本實驗室研製的顯色培養基對臨床念珠菌的檢驗效果及其應用價值。方法 用本實驗室研製的念珠菌顯色培養基與沙保羅瓊脂培養基對93株臨床分離株進行篩選，並比較兩種培養基的分離效果。對在本實驗室研製的念珠菌顯色培養基和科瑪嘉念珠菌顯色培養基上生長良好的菌株進行初步鑑別，並與API鑑定結果做比較。結果 本實驗室研製的念珠菌顯色培養基的選擇性明顯優於傳統的沙保羅瓊脂培養基，特異性與科瑪嘉的結果相一致。經API 20C AUX對可疑菌株進行鑑定，白色念珠菌符合率為95.2%，熱帶念珠菌的為100%，光滑念珠菌的為87.5%,克柔氏念珠菌的為100%,總符合率為94.6%。結論 本實驗室研製的念珠菌顯色培養基具有特異性高、選擇性強的特點，能快速、簡便地初步鑑別臨床常見念珠菌，適合用於臨床樣本中念珠菌的檢測。

　　【關鍵詞】 顯色培養基 念珠菌 臨床應用

　　念珠菌***Candida***是臨床標本中最常見的真菌，該菌可引起面板粘膜淺層或全身系統性感染，而且引起的感染每年都有增多的趨勢。因而對念珠菌做出快速鑑定十分重要。如今對臨床菌種鑑定的要求越來越趨向於程式簡單化，甚至能用一種鑑定方法鑑定出盡可能多的菌種。而念珠菌顯色培養基可從臨床標本中分離和初步鑑別出白色念珠菌***candida albicans***、克柔氏念珠菌***C.tropicalis***、光滑念珠菌***C.glabrata***和熱帶念珠菌***C.krusei***，且能夠縮短以上幾種菌的培養時間，同時對標本中雜菌抑制作用上明顯優於沙保瓊脂培養基[1]。為探討顯色法的實用價值，本實驗室用研製的念珠菌顯色培養基對93株臨床分離株進行測試，並與沙保羅是瓊脂培養基和科瑪嘉念珠菌顯色培養基比較，並用API 20C AUX對可疑分離株進行鑑定，為念珠菌顯色培養基的應用提供借鑑。

　　1 材料和方法

　　1.1材料

　　1.1.1 樣本來源

　　93株臨床分離株來自於廣州腫瘤醫院的樣本

　　1.1.2 培養基及試劑

　　念珠菌顯色培養基 本實驗室研製

　　科瑪嘉念珠菌顯色培養基 法國科瑪嘉公司

　　沙保羅瓊脂培養基 OXOID公司

　　API 20 C AUX鑑定條、API 20 E鑑定條 法國生物梅里埃公司

　　1.2 方法

　　1.2.1 沙保羅瓊脂培養基、本實驗室研製念珠菌顯色培養基及科瑪嘉念珠菌顯色培養基均按說明書配製。

　　1.2.2 將分離菌株分別劃線接種到沙保羅瓊脂培養基和本實驗室研製的念珠菌顯色培養基上，30℃培養48 h後觀察菌落的生長情況。

　　1.2.3將在沙保羅瓊脂培養基中生長，而在本實驗室顯色培養基受抑制的20株菌株進行革蘭氏染色及用適宜的API鑑定條進行鑑定。

　　1.2.4 將顯色培養基上分離培養的念珠菌疑似樣本，挑取單菌落分別劃線接種於本實驗室研製的和科瑪嘉的顯色培養基中，30℃中培養48 h，觀察菌落特徵。

　　表1結果的判讀表

　　Table 1 Interpretation table of results

　　1.2.5 同時將顯色培養基上分離培養的念珠菌稀釋成2麥氏濁度的菌懸液，按照API 20C AUX的說明書進行操作，30℃孵育48～72h讀取結果，用ATBCIRS軟體自動處理編碼得出念珠菌菌名。

　　2 結果

　　2.1 顯色培養基的分離效果

　　沙保羅瓊脂培養基及本實驗室研製的顯色培養基分離效果如表2所示。在沙保羅瓊脂培養基中生長，而在本實驗室顯色培養基受抑制的20株菌株經過革蘭氏染色後發現均為革蘭氏陰性菌桿菌，選用API 20 E對其進行鑑定，結果如表3所示，這些菌株均為腸桿菌科的細菌，而非念珠菌，在沙保羅瓊脂培養基上表現為假陽性，而在本實驗室研製的顯色培養基上得到了很好的抑制。表明顯色培養基的選擇性明顯優於沙保羅瓊脂培養基。

　　表2 兩種培養基分離效果比較

　　Table 2 the separation of two media

　　表3 20株菌的API鑑定結果

　　2.2 顯色培養基的特異性及符合率試驗

　　本實驗室研製的顯色培養基和科瑪嘉顯色培養基在初步鑑別念珠菌種上的效果相同，37株菌與API鑑定的總符合率能達到94.6%。經顯色培養基初步鑑別為白色念珠菌的21株菌，除1株被API鑑定為葡萄牙念珠菌外，其餘20株均被鑑定為白色念珠菌，符合率為95.2%;經顯色培養基初步鑑別為為光滑念珠菌的8株菌，除1株被API鑑定為挪威念珠菌外，其餘7株均被鑑定為光滑念珠菌，符合率為87.5%;而熱帶念珠菌和克柔氏念珠菌在顯色培養基上初步鑑別的結果與API鑑定符合率均達到100%。表明顯色培養基對念珠菌各種的初步鑑別的特異性很高。

　　表4 三種方法結果比較

　　Table 4 The Results of three methods

　　3 討論

　　對念珠菌建立起鑑別性顯色快速檢測技術, 實現對致病菌的快速檢測, 可以大大地降低工作量、節省人力和物力, 因而在臨床疾病診斷中對提高檢測樣本效率具有十分重要的意義。目前, 國內外已有不少應用顯色培養基進行致病菌分離的文獻報導 [2-4]。

　　臨床上最常見的4種念珠菌白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌和克柔氏念珠菌佔念珠菌總數的95.3%[5], 而深部真菌感染中念珠菌的比例高達87.5%～94.5%[6-7]。本實驗室研製的顯色培養基鑑定的37 株念珠菌中白色念珠菌佔20 株***54.1%***,在念珠菌中所佔比例最高，與國內相關報道相似[8]。熱帶念珠菌6株***16.2%***、 光滑念珠菌7 株***18.9%***、克柔念珠菌2 株***5.4%***。四種念珠菌佔鑑定總株數的94.6%。

　　已有文獻指出，沙保羅培養基用於念珠菌菌檢測容易造成漏檢或誤檢[9]。本次研究發現有20株在念珠菌顯色培養基受抑制的菌株在沙保羅瓊脂培養基上有生長，經過API鑑定都為腸桿菌科的菌株。沙保羅瓊脂培養基容易受到腸桿菌科的雜菌干擾造成假陽性的現象與黃曉燕等[10]的研究結果相符。從比較的結果可以看出，念珠菌顯色培養基的選擇性明顯優於沙保羅瓊脂培養基。

　　念珠菌生長較慢，傳統的鑑定方法比較繁瑣，需時較長且準確率不高，而採用API鑑定條等自動或半自動方法雖能將菌鑑定到種，但價格比較昂貴，不適合中小型醫院及檢驗機構的大量使用。而本實驗室研製的念珠菌顯色培養基中含有多種酶底物，可分別與白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌的不同酶類作用，從而呈現不同的顏色反應，達到在分離菌株的同時還可以對以上4種菌進行初步鑑別。與科瑪嘉念珠菌顯色培養基的比對顯示兩者的效果相當，均優於沙保羅瓊脂培養基***不能區分念珠菌的各個種***。另外，顯色培養基對念珠菌的初步鑑別需時約48h，而傳統分離鑑定方法需要3～5天出報告，因而顯色培養法能及時給臨床治療提供依據，對由念珠菌感染引起的疾病治療具有重要意義，同時顯色培養法鑑別符合率高，大幅度減少後續鑑定工作，而且該培養基製備簡單，使用方便，價格相對便宜，適合在基層單位推廣。

　　參考文獻

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