野生鬆乳菇菌絲在不同培養基上的分離試驗

　　摘要以野生鬆乳菇的子實體作為分離材料,取子實體的柄基進行組織分離,分別接入不同配方的培養基上進行培養試驗,結果表明,葡萄糖20g、酵母1g、MgSO4·7H2O 0.5g、瓊脂20g、鬆根液100mL***100g鬆根+500mL水煮沸過濾***、腐殖土水100mL***100g腐殖土+500mL水煮沸過濾***,加水至1 000mL的培養基上菌絲生長最好。
　　關鍵詞鬆乳菇;培養基;菌絲生長

　　鬆乳菇***Lactarius deliciosus***,別名鬆菇,其質脆味美,營養豐富,深受人們喜愛,每年5~6月和10~11月有鬆乳菇上市,商品價值較高。近年來,野生鬆乳菇產量逐年下降,人工開發已成發展趨勢[1-6]。通過對野生鬆乳菇子實體進行分離,篩選出適合菌絲生長的培養基,以期為開發利用鬆乳菇奠定基礎。
　　
　　1材料與方法
　　
　　1.1試驗材料
　　野生菌株採自江西省吉安縣鳳凰鎮松樹林中,採摘朵形正常、生長健壯、內菌幕剛破、無蟲害、成熟的新鮮子實體。
　　1.2試驗方法
　　1.2.1母種培養基的配製。配方:①葡萄糖20g,酵母1g,MgSO4·7H2O 0.5g,瓊脂20g,鬆根液100mL***100g鬆根+500 mL水煮沸過濾***,腐殖土水100mL***100g腐殖土+500mL水煮沸過濾***,水加至1 000mL。②腐殖土液200mL***200g腐殖土+1 000mL水煮沸過濾***;青松針液200mL***300g青松針+1 000mL水煮沸過濾***,鬆根液200mL***300g鬆根+1 000mL水者沸過濾***;啤酒糟200mL***200g乾啤酒糟+1 000mL水煮沸過濾***;葉酸0.01g;瓊脂20g;水加至1 000mL。③除未加入葉酸0.01g,其他配方同②。④去皮馬鈴薯200g***切薄片加水1 000mL煮沸過濾***,葡萄糖20g,瓊脂20g,水加至1 000mL。將以上4種配方分別裝入15mm試管,每支10mL,每組100支,於121℃下滅菌30min,冷卻做成斜面培養基。
　　1.2.2組織分離。將子實體反覆沖洗乾淨,取柄基用酒精處理表面,在無菌條件下取中間部分切成小薄片,用接種針接入不同的培養基斜面上,每個處理接種30支試管。將接好種的試管置入人工氣候箱內,在恆溫25℃下進行培養,3d後觀察菌絲萌發生長情況,每天檢查1次,將汙染的試管揀出。
　　1.2.3孢子分離。將一菌蓋厚實、菌柄粗壯、外觀光潔、無病蟲危害的野生鬆乳菇切除柄基,反覆沖洗,用幹紗布吸去表面水分後,噴灑75%酒精進行消毒,再用自來水反覆沖洗,用紗布擦乾,放在消好毒的玻璃鐘罩內進行孢子收集。獲得孢子後,用蒸餾水稀釋,用滴管接入不同的培養基斜面上,每個處理接種30支試管。將接好種的試管置入人工氣候箱內,在恆溫25℃下進行培養,3d後觀察菌絲萌發生長情況,每天檢查1次。
　　1.2.4原母種擴大再生母種。將分離獲得的純菌絲體分別接入上述培養基斜面上,每種培養基各接10支試管,置於25℃下培養,3d後每天觀察1次。 
　　2結果與分析
　　
　　2.1不同培養基的分離效果
　　組織分離除培養基③、④外,培養基①、②均獲得了菌絲純培養物,但在不同的培養基上組織分離的成功率不一致。菌絲長勢因培養基不同而異,培養基①菌絲淺灰色,濃密,絨毛狀生長;培養基②菌絲淺灰色,較疏,匍匐生長。孢子分離因汙染未獲成功。培養①比較適合用於鬆乳菇組織分離,分離的菌絲較粗而濃密,成功率為40%;培養基②上菌絲分離成功率高達60%,但菌絲體纖細而稀疏***見表1***。
　　2.2母種轉接培養觀察
　　接入培養基①、②、③、④上的菌絲體均能生長。以培養基①、④上的菌絲生長較好,菌絲體呈淺灰白色,較粗而濃密,放射型絨毛生長;培養基③上的菌絲體長到第4天全部停止生長,未長滿斜面;培養基②上的菌絲體生長速度快,比①、④培養基提早1.5d長滿斜面,但菌絲體稀而細。
　　
　　3結論
　　
　　試驗結果表明,葡萄糖20g、酵母1g、MgSO4·7H2O 0.5g、瓊脂20g、鬆根液100mL***100g鬆根+500mL水煮沸過濾***、腐殖土水100mL***100g腐殖土+500mL水煮沸過濾***,水加至1 000mL的培養基上鬆乳菇菌絲生長最好。
　　
　　4參考文獻
　　
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