克萊洛,A.C.

[拼音]:boceng cengxi

[外文]:thin layer chromatography

又稱薄層色譜。是將吸附劑、載體或其他活性物質均勻塗鋪在平面板(如玻璃板、塑料片、金屬片等)上,形成薄層(常用厚度為0.25毫米左右)後,在此薄層上進行層析分離的分析方法。

分析程式

將樣品溶液用毛細管點在薄層板的一端,置密閉槽中,加入適宜溶劑為流動相。由於毛細管作用,溶劑被吸上,沿板移動,並帶動樣品中各組分向前移動,這個過程稱為展開。由於各組分性質不同,移動距離不同,展開一定距離後,即得互相分離的組分斑點。可用適當方法使各組分在板上顯示其位置,如組分本身有顏色,即可直接觀察,否則可噴顯色試劑或在紫外燈下觀察熒光等辦法確定斑點位置。通常用比移值(Rf)表示組分移動的特性,其定義為:

在流動相、固定相和展開條件固定時,Rf值是組分的特性,可用以進行定性鑑別。實用時也常將樣品與已知純物質同時展開,比較二者移動情況,進行定性分析。

定量方法

可分為洗脫測定法和原位掃描法:

(1)洗脫測定法,將展開後的組分斑點處的吸附劑刮下,用適宜溶劑將組分洗脫溶出,然後用適當方法進行定量測定。常用方法為比色法、紫外-可見分光光度法,也可用電化學分析法等。

(2)原位掃描法,將展開後的薄層板放在光密度計內,以一定波長的光照射,同時使斑點移過光路,由於斑點對光的吸收,可繪出峰形曲線,由峰面積與標準樣品的吸收相比較而求出含量。

薄層層析法以吸附層析使用最為普遍。常用的吸附劑為矽膠、氧化鋁等。薄層層析和其他層析法一樣,除吸附法外,也可進行分配、離子交換、分子排阻等機理的層析,即將鋪制薄層的材料相應換為塗以固定相的載體、離子交換劑、凝膠等,其操作與吸附法基本相同。

制板

鋪制薄層板時,要求基底板潔淨平整,可用幹法或溼法鋪制。現常用溼法制板,即將吸附劑和粘合劑(如燒石膏)按一定比例混合,加入適量水調勻,用塗布器將此勻漿緩慢地移過基底板,放置晾乾,再經適當烘烤活化後即可使用。如不加粘合劑和水,直接將吸附劑均勻地鋪成薄層,則為幹法制板。現在市場上已有各種制好的薄層板出售,統稱預製板。

展開

有多種方式,以上行法最為常用。將薄層板垂直或傾斜放置,將展開溶劑加於低部,使之自下向上移動。下行法則為用濾紙將溶劑引至薄層上端,使其自上向下流動。平行展開時,將板平放,溶劑被吸上至薄層板點有樣品的一端,進行展開。使用圓形薄層板時,將樣品點在圓心附近,使溶劑自圓心向圓周方向移動,稱為環形展開或徑向展開;將樣品點在圓周位置,使溶劑自圓周向圓心移動的為向心展開,適用於Rf值大的組分的分離。將點樣品處附近的吸附劑颳去,使溶劑只能通過樣品點附近的較窄部分前進展開,因而溶劑前緣呈弧形的展開方式,也稱徑向展開,這種方式對較難分離的組分可能效果好些。

展開一次後取出薄層板使溶劑揮發,再用同一溶劑或換用其他溶劑再次沿此方向展開的稱多次展開。將樣品點在方形薄層板的一角,先沿著一個方向展開,然後將板轉動90°,再沿著另一方向展開的為雙向展開。多次展開和雙向展開都可加強分離效果。

特點

操作簡便,裝置簡單,除光密度計外,不需特殊裝置,分離效果較好,時間較短,一塊板上可同時分離許多樣品。除低沸點物質外,各種無機和有機化合物都可進行分離。

應用和發展

廣泛應用於石油、化工、醫藥、生化等方面。樣品用量一般為幾至幾百微克,是一種較實用、有效的微量分離分析方法。此法也可用於分離製備較大量的樣品,即使用較大較厚的薄層板,將樣品溶液在起始點處點成條帶狀,這樣可以分離毫克量樣品。

高效液相色譜法是用微細顆粒得到高效分離的辦法,也已用於薄層層析。使用5~10微米的吸附劑制板,可得較好的分離效果,為與一般的薄層層析法相區別,稱為高效薄層層析。其優點是樣品量少(只需納克量樣品)、展開距離小、展開時間短,是薄層層析法的一個重要發展。

參考文章

大黃止痛消炎散薄層層析研究中醫