麒麟竭中龍血素A的藥動力學研究論文示例
麒麟竭中龍血素A的藥動力學研究論文示例
1儀器與材料
1.1動物
SD大鼠66只,體質量(250±20)g,雌雄兼備,由中山大學醫學院動物中心提供,合格證號:(粵)2006A064。
1.2儀器
Waters高效液相色譜儀:515 HPLC泵,2487雙波長吸收監測器,N-2000雙通道色譜工作站(浙江大學智慧資訊工程研究所);TDL80-2B臺式離心機(上海安亭科學儀器廠);SCQ5201超聲儀(上海超聲波儀器廠);ZH-2 BLENDER渦旋混合器(天津藥典標準儀器廠)。
1.3材料
廣西產龍血竭(廣西中醫學院製藥廠提供);龍血素A對照品(中國藥品生物製品檢定所提供,批號:200402);乙腈、甲醇(色譜純),乙酸乙酯、無水乙醇、冰醋酸(分析純)。
2方法與結果
2.2血樣的採集和處理
大鼠禁食(自由飲水)12 h後,按100 g大鼠給予龍血竭250 mg,灌胃給藥。分別在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h於頸動脈取血,置於用肝素預處理過的離心管中。取全血1 mL置離心管中,加入乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL,渦旋混合均勻,3 000 r·min-1離心10 min,取上清液,提取3次,合併上清液,50 ℃水浴揮幹,於殘渣中加入100 μL甲醇,超聲處理使之溶解,12 000 r·min-1離心10 min,取上清液作為樣品,注入高效液相色譜儀進行測定,記錄色譜圖與峰面積,採用外標法定量。
2.3方法學考察[3]
2.3.1龍血素A對照品貯備液的製備取龍血素A對照品,用甲醇配製成每1 mL約含100 μg的溶液,作為對照品貯備液。
2.3.2方法專屬性取大鼠2只,實驗前禁食12 h,自由飲水,1只做空白對照,1只按100 g給予龍血竭250 mg灌胃給藥,給藥2 h後取血樣,按“2.2”項下方法操作測定。由圖1可見,全血中的內源性物質不干擾龍血素A的測定,表明本方法有較好的.專屬性。[PSD261;S*2〗A.空白血漿; B.空白血漿+對照品; C.樣品圖1 HPLC圖譜Figure 1HPLC chromatograms
2.3.3標準曲線與最低檢測限取空白全血適量,精密加入龍血素A對照品儲備液,配製質量濃度為0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·mL-1的系列濃度標準溶液,按“2.2”項下的方法,自“加乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL”起,依法操作,記錄峰面積。以質量濃度(ρ)為橫座標,峰面積(A)為縱座標進行迴歸,結果表明龍血素A的質量濃度在0.076~4.836 μg·mL-1範圍內與峰面積線性關係良好,迴歸方程為:A=49679ρ+2784.3,r=0.998 3(n=7)。取標準曲線用溶液,逐步稀釋至溶液中龍血素A的響應值約為基線噪音的3倍(S/N=3),記錄色譜圖,得出最低檢測限(LOD)為0.025 μg·mL-1。
2.3.4相對回收率與精密度精密量取對照品儲備液,以空白全血分別配成高、中、低3種質量濃度(4.836、1.209、0.076 μg·mL-1)的樣品溶液,按 “2.2” 項下的方法,自 “加乙腈2 mL、 乙酸乙酯 1 mL”起,依法操作。記錄峰面積並代入標準曲線計算各樣品濃度,計算相對回收率。結果表明,高、中、低3個質量濃度的樣品的相對回收率均高於80%。見表1。取以上高、中、低3個質量濃度的樣品溶液於同一天內連續測定3次,計算日內RSD;每天測定3種濃度樣品各1次,連續測定3 d,計算日間精密度RSD。結果日內和日間精密度RSD值均小於10%,表明該法精密度較好。見表1。
2.3.5樣品穩定性精密量取對照品儲備液,以空白全血配製質量濃度為0.076、0.605、1.209、2.418 μg·mL-1的樣品,分別考察室溫25 ℃放置0、4、12、24 h,-20 ℃冰箱放置24 h,-20 ℃下反覆凍融3次的穩定性。結果各樣品的RSD值均在2.76%~11.42%(n=6)之間,符合《中國藥典》相關規定,表明樣品穩定性較好。