藤茶止咳化痰作用的研究論文
藤茶止咳化痰作用的研究論文
藤茶俗稱端午茶、藤婆茶。野生藤茶廣泛分佈在我省梵淨山地區，其味甘甜性涼，具有清熱解毒、抗菌消炎、鎮咳祛痰等功效，民間常常用來治療感冒發熱等疾病的。目前為止還沒有看見有和它相關的止咳、化痰藥理方面的研究報道。因此筆者對藤茶進行止咳、化痰作用的動物實驗研究，為藤茶的綜合利用提供科學依據。
1材料
1.1實驗動物
昆明種小鼠，SPF級，雌雄各半，選用體重18～22g的健康動物，購自中山大學實驗動物中心，合格證號:粵檢證字SCXK(粵)-2009-0070。
1.2樣品來源與配製
1.2.1藤茶不同方法提取物配製有藤茶水提、石油醚提取、氯仿提取、乙酸乙酯提取4個成分組。每組均摺合生藥含量350mg/ml，給藥劑量相當於生藥3500mg/kg體重。
1.2.2藤茶水提成分不同劑量組配製藤茶水提成分高劑量組為直接給藥，摺合生藥含量350mg/ml，給藥劑量相當於生藥3500mg/kg體重;中劑量組為藤茶水提物加生理鹽水，按1∶2稀釋後給藥，摺合生藥含量117mg/ml，給藥劑量相當於生藥1167mg/kg體重;低劑量組為藤茶水提物加生理鹽水，按1∶8稀釋，稀釋後給藥，摺合生藥含量38.9mg/ml，給藥劑量相當於生藥389mg/kg體重。
1.2.3其它樣品配製生理鹽水(氯化鈉注射液)，NaCl含量0.9%;美沙芬陽性對照，含量為15mg/片，取2片溶解於20毫升生理鹽水中，製成懸液，其濃度為3mg/ml，劑量為30mg/kg體重;痰咳淨陽性對照，劑量為200mg/kg體重;陰性對照均採用蒸餾水。
2方法
2.1濃氨水噴霧法研究止咳藥效
取昆明種小鼠120只，隨機分為8組，每組15只。設陰性(蒸餾水)對照，陽性對照(美沙芬)和藤茶石油醚提取成分組、氯仿提取成分組、乙酸乙酯提取成分組，水提取成分組，其中水提取成分組細分為高、中、低3個劑量組。
實驗前小鼠禁食不禁水12h，然後各組小鼠按0.3ml/20g體重灌胃給藥，其中陰性對照組給等體積蒸餾水。給藥後1h，小鼠接受噴霧，按一定時間噴入濃氨水氣霧，結束，立即取出小鼠，觀察有無咳嗽反應。觀察1min內咳嗽次數，若1min內出現3次以上典型咳嗽動作(腹肌收縮或縮胸，同時張大嘴，有時可有咳聲)者，算作“有咳嗽”。否則算作“無咳嗽”。以停止接觸氨水刺激後1min內咳嗽次數大於或等於3次判為陽性，個別動物在實驗中出現死亡或休克，判為咳嗽陽性。用序貫法(上下法)求出引起半數小鼠咳嗽的噴霧時間(EDT50)。計算值，若值大於130%，說明有的止咳作用。若值大於150%，說明有顯著的止咳作用(陳奇，2006;羅霄山等，2004;羅文敏等，2011)。
EDT50=log-1c/n(式中n為動物數，c為rx值的總和，r為每劑量組的動物數，x為劑量(即噴霧時間)的對數。)=給藥組的.EDT50/對照組的EDT50×100%
2.2對小鼠氣管酚紅排泌量的影響
標準酚紅曲線的繪製:使用分析天平準確稱取一定量的酚紅，用5%碳酸氫鈉溶解，配成每1ml含12.5μg，然後順次進行倍比稀釋成每毫升含酚紅6.25μg、3.125μg、1.5625μg、0.7813μg、0.3906μg、0.1953μg、0.0977μg、0.0488μg，用分光光度計測OD值。以酚紅濃度為縱座標，OD值為橫座標，根據酚紅濃度和OD值計算出迴歸方程。根據迴歸方程計算出小鼠酚紅的排洩量(陳奇，2006)。
取昆明種小鼠50只，隨機分為5組，每組10只。
設陰性(蒸餾水)對照組、陽性(痰咳淨)對照藥物組、藤茶水提取物低劑量組、中劑量組、高劑量組。實驗前小鼠禁食不禁水12h，然後各組小鼠按0.3ml/20g體重灌胃給藥，其中陰性對照組給等體積蒸餾水。給藥後30min，腹腔注射5%酚紅生理鹽水溶液0.2ml/20g，注射後30min，脫頸椎處死小鼠，剪取氣管，將各氣管段放入預先盛有1.5ml的5%NaHCO3溶液試管中，後置於渦流混合器上震盪2min，使氣管段中的酚紅完全釋放，檢測前試管中加入1molNaOH溶液0.1ml，離心(3000rpm，5min)，後將試管中溶液於721型分光光度計546nm處測OD值，根據迴歸方程計算出酚紅排泌量。
計算公式:y=0.119x-0.0059x為OD值，y為氣管酚紅排泌量(陳奇，2006;羅霄山等，2004;羅文敏等，2011)。
2.3統計學處理實驗
資料以“均數±標準差”表示，採用SPSS12.0統計軟體進行統計學處理。
3結果
3.1藤茶對濃氨水致咳小鼠的影響
藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物，灌胃給藥對刺激小鼠引起咳嗽的耐受時間與陰性對照組比較，均有顯著延長，在統計學上有顯著差異。其中藤茶水提取物的耐受時間最長，其R值達到210.38%，陽性(美沙芬)對照組的值為225.42%，可見其療效與陽性對照組相當，都達到顯效水平。
鑑於藤茶水提取物止咳作用顯著，又進一步研究藤茶水提物不同劑量組的止咳效果。結果可見，藤茶高、中劑量組值分別達到210.38%和173.78%都達到顯效水平，低劑量組值為137.09%達到有效水平。綜上，可見藤茶具有良好的止咳作用。
3.2藤茶對小鼠氣管酚紅排泌量的影響
由實驗結果可知，藤茶水提取物不同劑量灌胃給藥對小鼠支氣管分泌物量與陰性對照組比較，均有顯著增加，在統計學上有顯著差異。其中藤茶水提取物高、中劑量組氣管酚紅排泌量分別達到4.647±0.903μg/ml和5.424±1.465μg/ml，均高於陽性(痰咳淨)對照組的3.672±0.894μg/ml，說明藤茶水提物高、中劑量組化痰效果優於陽性藥物痰咳淨。綜上所述，說明藤茶具有很好的化痰效果。
4結論
1)藤茶不同方法提取物濃氨水致咳小鼠的實驗，結果表明藤茶水提物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物和石油醚提取物均顯示出一定的止咳作用，其中藤茶水提物的止咳效果最佳;2)藤茶水提物不同劑量組進行濃氨水致咳小鼠的實驗，結果表明藤茶水提物高、中劑量組顯示出接近陽性(美沙芬)對照組的止咳效果;3)藤茶水提物不同劑量組進行小鼠氣管酚紅排泌量實驗，結果表明藤茶水提物高、中劑量組顯示出高於陽性(痰咳淨)對照組的化痰效果。
綜上所述，藤茶具有顯著止咳化痰的作用，這為藤茶的綜合開發利用提供了科學依據。
[參考文獻]
陳奇，2006.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社:625-626.
羅霄山，許家騮，張誠光，2004.咳喘樂顆粒鎮咳、祛痰、平喘作用的實驗研究[J].中藥材，27(7):520-523.
羅文敏，尹軍強，鄭先玉，2011.桂龍咳喘寧片止咳化痰平喘藥效學的研究[J].時針國醫國藥，22(10):2464-2465.