分子生物學技術論文參考
分子生物學技術論文參考
隨著醫學的不斷髮展，生物學也不斷在創新，其中，現代分子生物學技術起到關鍵作用。下面小編整理了分子生物學技術論文，歡迎閱讀!
農產品安全檢測中的分子生物學技術
【摘 要】本文主要介紹了酶聯免疫分析技術、聚合酶鏈式反應技術、試紙條快速檢測技術、流動注射免疫分析技術等分子生物學檢測技術的原理、開發及其在農產品中有毒有害物質檢測中的應用。
【關鍵詞】農產品;有毒有害物質;分子生物學;檢測技術
0 前言
民以食為天，食以安為先。農產品安全性要求農產品中不應含有可能損害或威脅人體的物質或因素，它關係到人體健康和社會穩定。隨著世界經濟全球化、貿易自由化和農產品國際貿易的迅速發展，農產品安全已成為事關人民健康和構建和諧社會的重大戰略問題，及時、安全、準確地檢測出農產品中的病原微生物是農產品安全檢測的重要內容。隨著農產品分析物質的不斷微量和痕量化，農產品基質的不斷複雜，僅使用傳統分析技術已難以解決所有的問題。分子生物學技術不僅可以簡化前處理過程、而且操作簡便、檢測成本低、安全可靠，且能進行特異性處理分析，其在農產品分析中佔據越來越高的比例[1]，目前在農產品 檢測中常用的`技術包括：酶聯免疫分析技術(ELISA)、基因晶片技術、分子印跡技術、聚合酶鏈式反應(PCR)技術、試紙條快速檢測技術、流動注射免疫分析技術、生物感測器技術(biosensor)等。分子生物學技術解決了傳統農產品前處理所不能解決的問題，特別是在農產品中有毒有害物質檢測中發揮了重要的作用。
1 應用於農產品安全檢測中的分子生物學技術
1.1 酶聯免疫分析技術
酶聯免疫分析技術是20世紀70年代初期由荷蘭學者Weeman與Schurrs和瑞典學者Engvall與Perlman幾乎同時提出的。最初ELISA主要用於病毒和細菌的檢測，20世紀70年代後期開始廣泛應用於抗原、抗體的測定，範圍涉及到一些藥物、激素、毒素等半抗原分子的定性定量檢測。它是在RIA理論的基礎上發展起來的一種非放射性標記免疫分析技術。它利用酶標記物同抗原抗體複合物的免疫反應與酶的催化放大作用相結合，既保持了酶催化反應的敏感性，又保持了抗原抗體反應的特異性，極大的提高了靈敏度，且克服了RIA操作過程中放射性同位素對人體的傷害。酶聯免疫分析法在農產品安全檢測中最為常用[2]。農獸 藥殘留免疫分析方法的建立包括待測物選擇、半抗原合成、人工抗原合成、抗體制備、測定方法建立、樣本前處理方法和方法評價等步驟。ELISA具有樣品前處理簡單，純化步驟少，大量樣本分析時間短，適合於做成試劑盒現場篩選等優點，使其可試驗快速現場監測，是現階段農產品安全檢測領域應用較多的一項檢測技術。目前酶聯免疫檢測的農、獸藥殘留種類主要包括：有機磷農藥、擬除蟲菊酯類農藥、有機氯類農藥、氨基甲酸酯類、獸藥類等。
1.2 PCR技術(聚合酶鏈式反應技術)
該技術誕生於1985年，由美國Cetus公司和加州大學聯合建立。PCR技術利用變性與復性原理，在體外使用DNA 聚合酶，在引物的引導和脫氧核糖核苷酸(dNTP)的參與下將模板在數小時內進行百萬倍擴增。該技術可選擇性地放大特定的DNA序列，因此在農產品致病性微生物檢測方面發揮著越來越重要的作用[3]。實時定量PCR技術是近年發展起來的新型技術，該技術透過直接測定PCR 過程中熒光訊號的變化，利用電腦分析軟體對PCR過程中產生的擴增產物進行動態監測和自動定量，從而成功地實現了PCR從定性到定量的飛躍。而且，使用實時定量PCR技術不需要進行凝膠電泳，避免了交叉汙染，使反應具有更強的特異性和更高的自動化程度。隨著分子生物學技術的不斷髮展，多重PCR[4]、標記 PCR和不對稱PCR等多種不同的PCR方法都被應用於農產品檢測中，它們的應用使PCR技術擁有了更高的靈敏度和更短的週期[5]。
1.3 試紙條快速檢測技術
試紙條與試劑盒相比較具有更加易於攜帶、檢測更加迅速等優勢。在實際檢測過程中，特別是現場快速檢測，並不一定需要對每個樣品都獲得定量資料 而只需要定性地判別出某個樣品是否含有某種農獸藥，含量是否超過規定標準既可[6]。因此只需要幾分鐘或十幾分鍾就可以獲得結果的快速檢測試紙條是最為合 適的檢測工具[7]。試紙條技術與試劑盒相類似，其特點是以微孔膜作為固相載 體。標記物可用酶或各種有色微粒子，如彩色乳膠、膠體金、膠體硒等，以紅色的膠體金最為常用。固相膜的特點在於其類似濾紙的多孔性。液體可穿過固相膜流出，也可以透過毛細管層析作用在膜上向前移行。常用的固相載體膜為硝酸纖維素膜、尼龍膜等。試紙條技術主要包括酶標記免疫檢測技術(immunoenzyme labeling technique)和膠體金標記免疫檢測技術(immunogold labelling technique)。酶標記免疫檢測技術是以酶為示蹤標記物，而膠體金標記免疫檢測技術是以膠體金作為示蹤標記物，應用於抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。
1.4 流動注射免疫分析技術
流動注射免疫分析法是將速度快、自動化程度高、重現性好的流動注射分析與特異性強、靈敏度高的免疫分析集為一體。這種分析方法具有分析時間短、需要樣品量小和操作簡便等特點[8]。利用FIIA對一些樣品分析，測定耗時不足 1min。FIIA有：均相FIIA和非均相FIIA。流動注射免疫分析主要包括：流動注射脂質體免疫分析技術、流動注射熒光檢測、流動注射化學發光檢測、流動注射分光光度檢測和流動注射電化學檢測。利用FIIA 是一種靈敏性、專一性、準確性好、快速、節約成本的方法，樣品也不需要預處理和富集。
2 結語
隨著經濟的全球化發展和農產品的跨區域、跨國際流通，對農產品病原菌的檢測要求也越來越高。從定性和定量兩方面出發，準確、快速、經濟的檢測 方法是農產品安全檢測的發展方向。儘管分子生物學檢測方法具有諸多優點，但目前它們大多處於實驗室階段，不能廣泛應用於實踐，僅能作為標準檢測方法的參考。因此，在今後的工作中應進一步加快研究步伐，建立真正實用的農產品快速檢測方法。產品快速檢測方法。
【參考文獻】
[1]楊大進.改革開放30年食品理化檢測方法的發展[J].中國食品衛生雜誌，2009，21(4)：309-312.
[2]尤敏霞.酶聯免疫吸附法在食品檢驗中的應用[J].河南預防醫學雜誌，2009，20(3)：237-238，240.
[3]周曉紅，李暉，楊杏芬.食品中諾如病毒RT-PCR檢測技術研究進展[J].國外醫學衛生學分冊，2009，36(4)：234-238.
[4]宋岱松.多重PCR技術在食品安全檢測中的應用[J].山東畜牧獸醫，2009，30(5)：57-58.
[5]雷永良，王曉光，葉碧峰，梅建華，柳付明，陳莎彬，蘭進權，李永芬，陳秀英.實時熒光定量技術在食品汙染物監測中的應用[J].中國衛生檢驗雜誌，2009，19(4)：828-830，857.
[6]黃小燕，梁珠嫻，李繁，魯玉花.鹽酸克倫特羅快速檢測試紙條的應用探討[J].雲南大學學報：自然科學版，2008，30(S1)：446-449.
[7]高志賢，周煥英.食品安全現場快速檢測技術研究進展[J].上海食品藥品監管情報研究，2008(2)：42-46.
[8]金紹祥.流動注射分析法與多種儀器分析聯用的進展[J].理化檢驗：化學分冊，2009，45(2)：238-241.