基因工程載體分析報告範本

　　摘要：

　　基因工程已經成為生物科學中不可或缺的一部分.也是最令人類充滿無限遐想的一門科學.自從解開人類基因組後,長生不老等就古老的傳說又再度流行起來.儘管現在的基因技術還不能做到讓你真的長生不老,但是基因療法等技術的出現已經讓人們看到了基因工程的生命力。基因工程是指在體外將核酸分子插入病毒、質粒或其它載體分子，構成遺傳物質的新組合，並使之參入到原先沒有這類分子的寄主細胞內，而能持續穩定地繁殖。基因載體是作為基因匯入細胞的工具。猶如火箭能把衛星射向九天一樣，基因載體可以把目的基因送入靶細胞內，從而發揮目的基因的特定功能。

　　關鍵詞：基因、載體、運載、自主複製、表達

　　正文：

　　載體是指運載外源DNA有效的進入受體細胞內的工具。載體同外源DNA在體外重組成DNA重組分子，在進入受體後形成一個複製子，即形成在細胞內能獨自進行自我複製的遺傳因子。

　　1. 基因載體是把基因匯入細胞的工具，他的作用是①運載目的基因進入宿主細胞，②使之能得到複製和進行表達。

　　2. 基因載體的分類：

　　根據來源：質粒載體、噬菌體載體、病毒載體

　　根據用途：克隆載體、表達載體

　　根據性質：溫度敏感型載體，融合型表達載體、非融合型表達載體。作為載體必須滿足的條件：①有多種限制性內切酶的切點，但每一種酶最好只有一個切點；②外源DNA插入以後載體在受體細胞中自我複製；③有便於選擇的標記基因；④具有促進外源DNA表達的調控區。

　　一、質粒載體

　　質粒是在許多種細菌中發現的染色體外的遺傳因子。它是閉合環狀雙鏈DNA分子，大小1kb到200kb不等。能自主複製，但要利用寄主細胞複製染色體的同一組酶系。有某些基因，如抗藥性基因，對寄主的生長是有利的。

　　質粒的複製分鬆弛型和嚴謹型兩種。鬆弛型質粒是指質粒的複製跟細菌染色體的複製不同步，一般在一個菌體內能複製10-200 複製；嚴謹型質粒是指質粒複製跟細菌染色體同步，一般含有1-10 複製。

　　1、質粒的基本特性

　　（1）．質粒的複製

　　通常一個質粒含有一個與相應的`順式作用控制要素結合在一起的複製起始區（整個遺傳單位定義為複製子）。在不同的質粒中，複製起始區的組成方式是不同的，有的可決定複製的方式，如滾環複製和 θ 複製。在大腸桿菌中使用的大多數載體都帶有一個來源於 pMB1 質粒或 ColE1 質粒的複製起始位點。

　　（2）．質粒的複製數

　　質粒複製數分為嚴謹型與松馳型。嚴謹型質粒每個細胞中複製數有限，大約 1 ～幾個；松馳型質粒複製數較多，可達幾百。

　　（3）．質粒的不相容性

　　兩個質粒在同一宿主中不能共存的現象稱質粒的不相容性，它是指在第二個質粒匯入後，在不涉及 DNA 限制系統時出現的現象。不相容的質粒一般都利用同一複製系統，從而導致不能共存於同一宿主中。兩個不相容性質粒在同一個細胞中複製時，在分配到子細胞的過程中會競爭，隨機挑選，微小的差異最終被放大，從而導致在子細胞中只含有其中一種質粒。

　　（4）．轉移性

　　質粒具轉移性。它是指在自然條件下，很多質粒可以透過稱為細菌接合的作用轉移到新宿主內。它需要移動基因 mob ，轉移基因 tra ，順式因子 bom 及其內部的轉移缺口位點 nic。

　　2、質粒DNA的製備與注意事項：

　　細菌的培養：從瓊脂平板上挑取單菌落接入5ml含適合抗生素的LB培養基中，於37℃搖床中振盪培養過夜。

　　保種：取80%滅菌甘油300ul加入1ml菌種中冷凍儲存。

　　質粒提取：

　　（1）1.5ml過夜培養物倒入EP管，5000rpm/10min，棄上清。

　　（2）加入150ul冰預冷的solutionⅠ，vortex，使菌分散重懸。

　　（3）加入300ul solutionⅡ，來回顛倒4-6次，冰上≤5min。

　　（4）加入225ul solutionⅢ，來回顛倒4-6次，冰上≥5min。

　　（5）6000rpm/15min（或12000rpm/5min）。

　　（6）吸上清移入新EP管，等體積酚/氯仿抽提一次，vortex，12000rpm/15min。